Durante la última década, la industria de los indicadores biológicos ha enfrentado nuevos desafíos; como la necesidad de un más rápido reprocesamiento de materiales reutilizables, el desarrollo de nuevos dispositivos e instrumentos médicos, la aparición de nuevas tecnologías para su reprocesamiento y la necesidad de nuevos indicadores apropiados para su control. Ante estos nuevos desafíos, los fabricantes de productos para el control de la esterilización han invertido sus esfuerzos. En el desarrollo de una nueva gama de indicadores biológicos de lectura rápida, basados ​​en la fluorescencia en una etapa temprana método de detección, proporcionando instrumentos esterilizados en menos tiempo. La fluorescencia es un fenómeno luminoso a corto plazo, indetectable para el ojo humano, a través del cual las sustancias con capacidad de fluorescencia, absorben energía, se «excitan» y luego irradian luz, es decir, fluorescencia (ver fig. 1). Cada molécula fluorescente es capaz de absorber e irradiar energía con ciertas características, que permiten su estimulación y detección a través de filtros y sensores especiales (por ejemplo, en la posición de lectura de una incubadora con lector automático).

Terragene ® , pionero en innovación tecnológica para el control de infecciones, desarrolló indicadores biológicos basados ​​en el sistema de fluorescencia cuando las esporas inoculadas permanecen viables después del proceso de esterilización, significativamente reduciendo los tiempos de incubación(Bioescol Distribuidores Autorizados )

El sistema de detección temprana de la fluorescencia se basa en una actividad enzimática que deriva de una enzima (proteína conactividad intrínseca) que se encuentra en las esporas. Estas enzimas estarán disponibles en el momento en que las esporas entren en contacto. Con el medio de cultivo, se hidratan y germinan. En ese momento, las enzimas comenzarán a actuar sobre el sustrato fluorescente que se encuentra en el medio de cultivo

Lo que sucede ya que la unión entre el sustrato y la enzima va a determinar cómo se comporta el BI,y se describe por la cinética de reacción. En otras palabras, la aparición, permanencia y desaparición de La fluorescencia depende de la actividad enzimática.

La reacción enzimática es un proceso dinámico, y debido a esto, no es posible saber a priori exactamente momento en que emergerá la fluorescencia. El momento y la intensidad de la fluorescencia dependerán de cantidad de enzimas disponibles que están activas después del proceso de esterilización, sobre el estado del medio de cultivo después de la exposición, y sobre la temperatura de incubación, entre otros. Por lo tanto, para detectar fluorescencia en el menor tiempo posible y para determinar si el resultado es positivo o negativo, se debe medir la fluorescencia durante todo el proceso de incubación relativizando cada medición a un valor de referencia; es decir, ellas mediciones corresponden a las diferencias entre el valor medido y el valor de referencia (es diferente por cada BI). Cuando esa diferencia es mayor que un valor preestablecido para el BI en consideración, el resultado será positivo, y esto podría suceder en cualquier momento durante el período de incubación. Cuando la diferencia está por debajo de valor de referencia, el resultado será negativo al final del programa.

La curva de fluorescencia BI de la cinética enzimática consta de cuatro fases claramente definidas que coinciden con la fluorescencia. emisión en caso de que haya esporas viables después del proceso de esterilización. Si ninguna espora sobrevive al ciclo de esterilización, no habrá germinación ni crecimiento, ni fluorescencia ni actividad enzimática. En este caso, el resultado será inevitablemente sea negativo.

La etapa inicial o de latencia es el tiempo necesario para que las esporas entren contacto con el medio de cultivo, para notar las condiciones favorables les da, para alcanzar la temperatura mínima de germinación y para Producir el proceso de germinación real. En esta etapa no hay fluorescencia, ya que todavía no hay enzimas disponibles para reaccionar con el sustrato y generar fluorescencia (∆F = 0), y por lo tanto, la incubadora con lector automático no producirá ningún resultado. Este es uno deLas principales razones por las cuales los indicadores biológicos necesitan un mínimo Tiempo de incubación. En esta etapa, el valor de referencia de la fluorescencia estomado, con el fin de hacer las medidas comparativas posteriores. En la etapa lineal, la velocidad de reacción es la más alta, ya que las enzimas entran en contacto con los sustratos en el medio de cultivo, dando lugar a incrementos notables de fluorescencia (∆F> 0). En este punto,el lector automático realiza lecturas de fluorescencia durante el período correspondiente a cada programa de BI, o hasta que detecte una diferencia entre ellos, dando un resultado positivo. Durante la etapa de saturación o estacionaria, no hay enzima neta actividad ya que todas las enzimas están ocupadas con sustrato, por lo tantono hay aumento neto de fluorescencia (∆F = 0). Si se incuba un BI y intenta leerlo durante esta etapa de actividad enzimática (por ejemplo, porre-incubar el BI), el resultado dado por el lector automático será negativo, porque el valor de referencia inicial de la fluorescencia estará en su máximo, y por lo tanto, la incubadora no detectará ninguna diferencia a lo largo de la incubación. El resultado será negativo incluso cuando el indicador ha dado un resultado positivo durante su primera incubación (cuando la referencia valor fue el correspondiente a la actividad enzimática inicial escenario). Durante la etapa de inhibición o disminución (∆F <0), la pendiente es lineal y negativo, ya que el sustrato comienza a agotarse, y / o la inhibición fenómeno ocurre debido a un exceso de producto. Si un indicador en este el punto de la etapa se vuelve a incubar, como puede suceder el día después de la etapa inicial incubación, el resultado dado por el lector automático será negativo (ella enzima se inhibe o no hay más sustrato para procesar). Para esto, Un BI basado en lectura de fluorescencia debe incubarse inmediatamente después de su activación. bajo ninguna circunstancia debe volver a incubar Indicadores biológicos basados ​​en fluorescencia.

fuente: Terragen.ar